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概念:
Transwell小室通過模擬細胞穿越基底膜的行為,來研究細胞的運動性。Transwell小室由一個多孔的聚碳酸酯膜和上下兩個室組成。在一個杯子中間置入一層多孔隔斷而分成上下兩層。細胞被接種在上室,而下室包含誘導(dǎo)細胞遷移的成分,可以是另一種細胞也可以是人為添加趨化因子等。隨后,細胞通過膜上的孔隙遷移到下室,
可研究處理因素對目的細胞的遷移和侵襲能力的影響,以及細胞間相互作用等對細胞遷移和侵襲的影響。
原理與方法:
取生長狀態(tài)良好的細胞進行饑餓處理約24h。準備Transwell小室,根據(jù)實驗設(shè)計,選擇是否添加基質(zhì)膠包被。將處理好的細胞消化重懸,用無血清培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度至適當密度。在下室加入適量的誘導(dǎo)劑(血清)接種細胞,并將細胞懸液加入Transwell上室。將Transwell小室放回培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24-48h。實驗結(jié)束后,用4%多聚甲醛固定后用PBS洗滌小室1次;結(jié)晶紫染色10min,隨后用PBS洗滌2-3次。顯微鏡下隨機選取若干視野,計數(shù)遷移到膜下側(cè)的細胞數(shù)量。根據(jù)細胞數(shù)量計算細胞遷移或侵襲的百分率。
Transwell遷移/侵襲實驗
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