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概念：

外泌體是由所有體外和體內(nèi)細(xì)胞持續(xù)分泌的小膜泡 (30–150nm)，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡，包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)。外泌體天然存在于包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中。這些特異性分泌的細(xì)胞外囊泡可以介導(dǎo)細(xì)胞間通訊和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

原理與方法：

外泌體收集：①差速離心是外泌體分離的最常見技術(shù)之一，利用不同成分離心力不同，適合大量提取培養(yǎng)基中外泌體成分。②超濾法根據(jù)外泌體尺寸大小進(jìn)行分離，適用于細(xì)胞上清的提取，適用于純化大量外泌體。 ③凝膠排阻層析法，根據(jù)外泌體尺寸大小進(jìn)行分離，適合中等樣本量。④親和捕獲法，依賴于結(jié)合外泌體的抗體進(jìn)行捕獲，適合分離特定外泌體。

外泌體鑒定：①納米顆粒跟蹤分析技術(shù)（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）利用光散射和布朗運動的原理，獲得懸浮液中的樣本粒徑分布的檢測方法，能對懸浮液中的顆粒進(jìn)行全方位表征。分辨率高、檢測速度快、準(zhǔn)確度高。②透射電鏡是鑒定外泌體的金標(biāo)準(zhǔn)，點分辨率可以達(dá)到0.1nm，適合用來觀察外泌體類囊泡。③利用外泌體膜蛋白的抗體對外泌體進(jìn)行標(biāo)記，再用膠體金二抗指示出抗原的位置。膠體金在電鏡下呈現(xiàn)出黑色顆粒，同時從形態(tài)學(xué)及免疫學(xué)上鑒定外泌體。④外泌體形成和釋放后，會帶上特定的標(biāo)志性蛋白，利用WB對這些蛋白進(jìn)行檢測，鑒定外泌體。

                                         外泌體鑒定